Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
*Для газовой хроматографии с применением капиллярной колонки и делением потока рекомендуется прибавлять к смеси веществ, применяемых для калибровки, компоненты с большей длиной цепи.
**Эти значения, вычисленные с использованием калибровочной кривой, даны в качестве примера для колонки, заполненной полиэтиленгликоль сукцинатом Р (1) и макроголом 20 ООО Р (2).
Раствор сравнения (b). 1.0 мл раствора сравнения (а) доводят гептаном Р до 10.0 мл.
Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором в следующих условиях:
- колонка стеклянная или из нержавеющей стали длиной от 2 м до 3 м и внутренним диаметром от 2 мм до 4 мм, заполненная диатомитом носителем для газовой хроматографии Р с размером частиц от 125 мкм до 200 мкм, на который нанесено от 5% до 15% полиэтиленгликольсукцината Р или полиэтиленгликольадипината Р;
- газ-носитель - азот для хроматографии Р;
- скорость газа-носителя - 25 мл/мин;
- температура колонки - 180°С;
- температура инжектора и детектора - 200оС.
При необходимости или если указано в частной статье, температуру колонки увеличивают от 120°С до 200°С со скоростью 5°С в мин.
Хроматографировать возможно также на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором в следующих условиях:
- колонка капиллярная стеклянная или кварцевая длиной от 10 м до 30 м и внутренним диаметром от 0.2 мм до 0.8 мм, внутренняя поверхность которой покрыта слоем поли[(цианопропил)(метил)][(фенил) (метил)]силоксана Р или макрогола 20 ООО Р толщиной от 0,1 мкм до 0,5 мкм или другой подходящей неподвижной фазой;
- газ-носитель - гелий для хроматографии Р или водород для хроматографии Р;
- скорость газа-носителя - 1,3 мл/мин (для колонки с внутренним диаметром 0,32 мм);
- деление потока - 1:100 или менее в зависимости от внутреннего диаметра применяемой колонки (в случае использования колонки с внутренним диаметром 0,32 мм деление потока должно составлять 1:50);
- температура колонки - от 160°С до 200°С, в зависимости от длины колонки и используемой неподвижной фазы (для колонки длиной 30 м, покрытой слоем макрогола 2О ООО Р, температура должна составлять 200°С);
- температура инжектора и детектора - 250°С.
При необходимости или если указано в частной статье, температуру колонки увеличивают от 170°С до 230°С со скоростью 3°С в мин (для колонки, покрытой слоем макрогола 2О ООО Р)
Хроматографируют 0,5 мкл раствора сравнения (а). Чувствительность системы регулируют таким образом, чтобы высота основного пика на полученной хроматограмме составляла от 50% до 70% шкалы регистрирующего устройства.
Определяют времена удерживания жирных кислот, входящих в состав калибровочной смеси. Хроматографируют 1 мкл раствора сравнения (b) и рассчитывают отношение сигнал/шум для пика, соответствующего метилмиристату.
Хроматографируют от 0,5 мкл до 1,0 мкл испытуемого раствора. Время хроматографирования должно в 2,5 раза превышать время удерживания метилолеата. Хроматограмму оценивают, как описанно ниже.
При использовании калибровочных смесей №1 или №3 хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
- на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических тарелок (n)
(2.2.28), вычисленное для пика, соответствующего метилстеарату, составляет не менее 2000 для набивной колонки и не менее 30 000 для капиллярной колонки;
- на хроматограмме раствора сравнения (а) коэффициент разделения (Rs)
(2.2.28) пиков, соответствующих метилолеату и метилстеарату, составляет не менее 1,25 для набивной колонки и не менее 1,8 для капиллярной колонки;
- на хроматограмме раствора сравнения (b) отношение сигнал/шум (2.2.28) для пика метилмиристата составляет не менее 5.
При использовании калибровочной смеси №2 хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
- на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических тарелок (n)
(2.2.28), вычисленное для пика, соответствующего метилкапрату, составляет не менее 1500 для набивной колонки и не менее 15 000 для капиллярной колонки;
- на хроматограмме раствора сравнения (а) коэффициент разделения (Rs)
(2.2.28) пиков, соответствующих метилкаприлату и метилкапрату, составляет не менее 2 для набивной колонки и не менее 4 для капиллярной колонки;
- на хроматограмме раствора сравнения (b) отношение сигнал/шум (2.2.28) для пика метилкапроата составляет не менее 5.
ОЦЕНКА ХРОМАТОГРАММ
Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать неразделенные пики (наличие компонентов с небольшим различием между временами удерживания, например, линоленовая и арахидоновая кислоты.
Качественный анализ. Строят калибровочную кривую, используя хроматограммы раствора сравнения (а) и данные Таблиц 2.4.22.
а) Для хроматограмм, полученных в изотермическом режиме, вычисляют логарифмы приведенных времен удерживания как функцию эквивалента числа атомов углерода в жирных кислотах. Калибровочная кривая насыщенных кислот представляет собой прямую линию. Логарифмы приведённых времен удерживания ненасыщенных кислот расположены на этой линии как точки, соответствующие не целым значениям «эквивалента длины цепи». Идентификацию компонентов жирных кислот испытуемого масла проводят, рассчитываая логарифмы приведённых времён удерживания пиков, полученных на хроматограмме испытуемого раствора, и устанавливая по калибровочной кривой «эквивалентны длины цепи».
